工作原理：
磷酸化 ERK（Thr202/Tyr204）檢測原理

磷酸化 ERK（Thr202/Tyr204）檢測用于測量在 Thr202/Tyr204 位點磷酸化的 ERK。與蛋白質(zhì)印跡法不同，該檢測完·全基于微孔板，不需要凝膠、電泳或轉(zhuǎn)膜。磷酸化 ERK（Thr202/Tyr204）檢測使用兩種標(biāo)記抗體，一種帶有供體熒光團(tuán)，另一種帶有受體。第一種抗體因其對蛋白質(zhì)上磷酸化基序的特異性結(jié)合而被選擇，第二種抗體因其能夠識別不依賴于其磷酸化狀態(tài)的蛋白質(zhì)而被選擇。蛋白質(zhì)磷酸化使得涉及兩種標(biāo)記抗體的免疫復(fù)合物形成，這使供體熒光團(tuán)與受體緊密接近，從而產(chǎn)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）信號。其強(qiáng)度與樣品中存在的磷酸化蛋白的濃度直接成正比，并在無需洗滌的檢測形式下提供了一種評估蛋白質(zhì)磷酸化狀態(tài)的方法。 

磷酸化 ERK 雙板檢測方案：
雙板方案涉及在 96 孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，然后進(jìn)行裂解，接著將裂解物轉(zhuǎn)移到 384 孔低體積檢測板中，之后加入磷酸化 ERK HTRF 檢測試劑。該方案能夠監(jiān)測細(xì)胞的活力和融合度。 

 

 

磷酸化 ERK 單板檢測方案：
使用 HTRF 試劑檢測磷酸化 ERK 可以在一個用于培養(yǎng)、刺激和裂解的單板上進(jìn)行。無需洗滌步驟。這個為高通量篩選設(shè)計的方案能夠?qū)崿F(xiàn)微型化，同時保持強(qiáng)大的 HTRF 質(zhì)量。 

 

 

簡化的通路：
MAPK/ERK 細(xì)胞信號通路

MAPK/ERK 信號級聯(lián)由參與生長和分化的多種受體激活。核心信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)引發(fā)對眾多細(xì)胞過程的調(diào)節(jié)，包括黏附、遷移、凋亡、分化和代謝。MEK1/2 在 Tyr204 和 Thr202 位點催化 ERK1/2 的磷酸化。作為響應(yīng)，ERK 磷酸化數(shù)百種細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核底物。MAPK 信號的廣泛復(fù)雜性和多樣性使 ERK 成為生物學(xué)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子和主要信號節(jié)點。